N-Nitroso Desethyl Amiodarone için metot geliştirme çalışması yapmaya çalışıyorum. Limiti çok düşük olduğu için numuneye spike yaptığımı geri kazanım alamıyorum. Birçok kolon, mobil faz ve solvent denedim. Aynı sorunu yaşayan ya da öneride bulunabilecek kimse var mı?
When you say the limit is low, does that mean you are working with a relatively high sample concentration?
If so, matrix effects are very likely your main issue. What does your sample preparation look like? It sounds like the API or finished product is simply dissolved in solvent without any cleanup.
Which columns have you tried so far?
Do you have a UV detector installed, or at least a way to monitor the API retention time?
If the API and the impurity elute at the same time (or very close), you will inevitably run into problems.
You could try to improve the separation by optimizing the gradient and/or changing the column chemistry, but with so little information provided it is difficult to give specific advice.
Another option is MS optimization. If your MS sensitivity can be improved by, say, one order of magnitude, you could dilute the sample tenfold, which often helps significantly with matrix effects.
2 Likes
Hello, may I ask what type of sample you have? Is it an active pharmaceutical ingredient or a finished formulation? Is it an injectable solution?
Bitmiş ürün formülasyonu da enjeksiyonluk çözelti formülasyonu da elimizde var. İkisi için de deniyoruz fakat geri kazanım alamıyoruz.
Söylemek istediğim şey aslında %100 AI limitin 18 ng/day olmasıydı. Limitten kastım buydu. Bunda da eğer numuneyi fazla seyreltirsek cihaza vereceğimiz numune konsantrasyonu çok düşük oluyor ve pik göremiyoruz (0.006 ppb gibi). API ve impürite pikleri çok yakın zamanlarda geliyor fakat birçok gradient ve kolon denedik. Yaklaşık 2 aydır üzerine çalışıyoruz. Bir sonuç elde edemedik. Matris efektinden kurtulmamız mümkün olmuyor.
Maybe try this one out.
Desethyl Impurity and API are seperated even on a quick run.
Maybe with a different gradient and flow this could work for you.
Have you tried NP chromatography ? Given that those compounds (API and desethyl) elute quite early on this application note on a normal C18 column.
Also changing pH could have an huge influence on separation here. I know LCMS is a little bit resricted on puffer selection but it would try different pHs and evaluate those results.
Regards,
Philipp